家蚕杆状病毒晚期表达因子LEF-9的功能研究

【摘要】家蚕杆状病毒（BmNPV）中的lef-9与lef-4，lef-8和p47共同编码的蛋白联合体的亚基可以在体外启动polh启动子转录。但是，其在基因转录中的调控作用和病毒复制繁殖中所起的作用还未见报道。在本研究中，我们借助Red重组技术成功构建了lef-9基因缺失型病毒lef-9-KO-Bacmid，并利用Bac-to-Bac系统构建了lef-9基因补回型病毒lef-9-Re-Bacmid。将构建好的病毒基因组DNA转染BmN细胞。研究发现，lef-9缺失型病毒不能生成有感染活性的病毒粒子，而补回型病毒能够恢复病毒的感染活性，表明lef-9基因是病毒感染形成有感染活性BV（Buddedvirus）的必需基因。为进一步了解lef-9缺失对BmNPV基因组复制及基因转录表达的影响，我们以具有代表性的早晚期基因和极晚期基因为研究对象，利用实时荧光定量PCR（qPCR）技术研究了lef-9对病毒复制和基因转录调控的作用机制。qPCR研究结果表明，lef-9缺失后，病毒基因组的复制未受到明显影响（P>0.05）；而病毒早期基因ie-1和lef-3，晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平相比较修复型与野生型病毒而言均有显著降低（P<0.05）；Westernblotting结果也显示lef-9基因缺失型病毒基本不表达蛋白LEF-3、VP39和P10（P<0.05）。同时，我们利用透射电镜技术对lef-9-KO-Bacmid、lef-9-Re-Bacmid和wtBacmid感染的家蚕BmN细胞进行观察，结果发现lef-9-KO-Bacmid感染的细胞并没有发现形成成熟的病毒粒子；而lef-9-Re-Bacmid和wtBacmid感染的细胞中均出现了明显的感染症状，装配形成了大量的病毒粒子。以上研究结果表明lef-9不是BmNPV病毒基因组复制的必需基因，但对病毒各个时期的基因转录及表达均有显著影响。电镜分析结果也进一步证实了上述结果。
【作者】石扬辉；
【导师】解纯刚；
【作者基本信息】浙江理工大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】家蚕核型多角体病毒（BmNPV）；lef-9基因；Red重组；BactoBac系统；基因表达调控；电镜观察；

【参考文献】
[1]林志伟.利用蛋白质组学技术解析化学杀雄剂SX-1致使甘蓝型油菜雄性不育机理研究[D].华中科技大学,生物化工,2013,硕士.
[2]杜彬彬.电子化人力资源管理与组织管理变革[D].华东师范大学,政治学理论,2004,硕士.
[3]吴玲玲.认知态度类动词的句法语义界面研究[D].西南大学,英语语言文学,2013,硕士.
[4]曹姝彦.中美高校德育目标实现的方法比较[D].北京化工大学,思想政治教育,2013,硕士.
[5]吉晓军.石墨烯—葡聚糖复合材料的自组装合成以及在耐药癌细胞内有效释放的研究[D].上海大学,2013.
[6]戴晓鑫.基于综合网管的GPON运行维护解决方案[D].河北工业大学,软件工程,2013,硕士.
[7]裴恩实.不同神经节段“胰俞”和“肾俞”对T2DM大鼠作用机制的实验研究[D].北京中医药大学,针灸推拿学,2014,硕士.
[8]杨绍国,周熙襄.AVO属性叠加剖面的正演模型及应用[J].石油地球物理勘探,1995,06:772-774+848.
[9]赵玉虎.战后日本经济自由违宪审查基准研究[D].山东大学,宪法学与行政法学,2012,硕士.
[10]雷小牛,邓铭江,李兰奇,李梅芝,杨桂玲,安景生.新疆克孜尔水库地震风险分析及防范研究[J].中国安全科学学报.2005(11)
[11]丰水强.感觉性受体TRPV1在女性膀胱过度活动症患者膀胱尿路上皮中的表达及临床意义[D].华中科技大学,外科学,2013,硕士.
[12]王彩红.含裂纹石墨烯/碳纳米管拉压性能的研究[D].华南理工大学,2014.
[13]贺金生,陈伟烈,刘峰.神农架地区米心水青冈萌枝过程的研究[J].植物生态学报,1998,05:2-8.
[14]邱华锋.四万词的词法结构和语义结构分析[D].南京师范大学,语言学及应用语言学,2012,硕士.
[15]袁继宏.BESⅢ主漂移室径迹重建过程中的噪声处理及性能研究[D].华中师范大学,光学,2013,硕士.
[16]唐世渭.企业数据仓库建设[J].金融电子化,2001,08:20-23.
[17]余其红.铁矿石资源多样化条件下烧结矿配矿优化研究[D].武汉科技大学,钢铁冶金,2014,博士.
[18]翟川,陈国广,任丽莉.盐酸奥昔布宁微孔渗透泵控释片的制备及其处方优化[J].中国新药杂志,2015,06:702-707.
[19]卢思施.江门市消防现役人员绩效考核体系研究[D].广东海洋大学,行政管理,2013,硕士.
[20]王新霞.新疆少数民族地区职业教育状况分析及对策研究[D].江南大学,教育学原理,2012,硕士.
[21]孙娅婷.国际废弃物贸易中的伦理问题探究[D].云南财经大学,伦理学,2013,硕士.
[22]刘一鸣.口供任意性保障问题研究[D].内蒙古大学,法律,2014,硕士.
[23]杜云涛.企业应急物流过程管理研究与应用[D].北京交通大学,2014.
[24]梁倩.培养高一学生化学学习自我效能感的实践研究[D].广西师范大学,学科教学,2013,硕士.
[25]邓倩.产品外观造型图饰设计系统及其应用研究[D].长安大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[26]唐小丽.云南省城镇居民人均消费与人均可支配收入关系的实证研究[D].云南财经大学,应用统计,2013,硕士.
[27]闫慧平.猪肝羧酸酯酶1水解磺胺类药物的特性研究[D].华中农业大学,预防兽医学,2014,硕士.
[28]珠拉.我国农业上市公司盈利质量研究[D].内蒙古农业大学,农业经济管理,2013,硕士.
[29]胡珉.对数据库中间件性能调优的设计与实现[D].沈阳工业大学,计算机技术与应用,2004,硕士.
[30]惠锋,金家峙.关键在于合理的配伍和工艺——浅谈沥青改性技术[J].交通世界.2003(Z1)
[31]程储旺.不确定性时滞大系统的分散鲁棒H_∞控制[J].自动化学报,2001,03:361-366.
[32]付东海.NGB三网融合应用之多媒体文件共享的设计与实现[D].北京交通大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[33]张琳琳.上市公司会计信息与股票价格相关性研究[D].辽宁大学,会计学,2012,硕士.
[34]孟庆璞.印度落后阶级透析：存在、斗争和展望[D].河北师范大学,世界史,2012,硕士.
[35]张婷.大学生网络偏差行为与自我中心、社会支持的关系[D].赣南师范学院,发展与教育心理学,2014,硕士.
[36]赵军.基于逆向运动学的人体运动图像跟踪算法研究[D].中国科学技术大学,模式识别与智能系统,2014,硕士.
[37]焦宏梅.全麻诱导期SLIPA喉罩与气管插管对乳腺癌改良根治术患者血流动力学和应激激素影响的比较[D].山东大学,麻醉学（专业学位）,2012,硕士.
[38]涂彬彬.microRNA水平及临床病理因素预测中晚期宫颈鳞癌同步放化疗疗效的初步研究[D].北京协和医学院,肿瘤学（专业学位）,2014,博士.
[39]曹雪芹.改进Blowfish算法在WSN中的应用研究[D].郑州大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[40]宋洪雪.Ramsey理论中若干问题的研究[D].河海大学,应用数学,2004,硕士.
[41]王卫苹.多级多层加密算法关键技术研究及应用开发[D].华北水利水电学院,计算机应用技术,2012,硕士.
[42]刘倩.解构主义思潮对思想政治教育的影响及对策探析[D].吉林大学,思想政治教育,2014,硕士.
[43]陈璇.股票融资融券交易的市场效应研究[D].山东财经大学,金融学,2013,硕士.
[44]汪光辉,王志腾,陈宇,赵楚军,张晗,文双春.基于石墨烯的被动锁模掺铒光纤孤子激光器[J].中国激光,2012,06:12-16.
[45]黄郁芳.柞蚕茧丝及丝腺体中金属元素定量分析方法研究[D].复旦大学,材料工程,2012,硕士.
[46]汪伟.中国大陆日本血吸虫对吡喹酮的敏感性研究[D].江苏省血吸虫病防治研究所,病原生物学,2012,硕士.
[47]邓芳.基于任务型教学模式的高中英语阅读教学研究[D].湖南师范大学,课程与教学论,2014,硕士.
[48]宋波.安徽省对外贸易就业效应研究[D].安徽大学,国际贸易学,2013,硕士.
[49]曹瑞楠.网络服务提供者侵权行为法律责任研究[D].云南财经大学,法律（专业学位）,2014,硕士.
[50]齐远伟.基于匿名登录的云计算隐私保护研究与应用[D].西北大学,计算机软件与理论,2013,硕士.